Dica do autor: Quando o objetivo é avaliar o perfil genético de muitas regiões do genoma simultaneamente — no enunciado, cerca de 30 mil genes — o pulo do gato é escolher uma técnica que permita análise paralela em larga escala. Microarrays são plataformas contendo dezenas de milhares de sondas fixadas em um suporte sólido; cada sonda é complementar a uma sequência alvo (um exon, um gene ou variantes conhecidas). Amostras de DNA (ou RNA, dependendo do projeto) são marcadas e hibridizadas ao chip; a intensidade do sinal em cada ponto reflete a presença/quantidade da sequência alvo. Existem variações: arrays de expressão para avaliar níveis de mRNA, arrays de SNP para genotipagem em larga escala e arrays de CGH para detecção de variações no número de cópias. O método é eficiente em custo e tempo quando se busca frequência de variantes conhecidas, assinaturas de expressão ou padrões de genótipos em muitos indivíduos. Uma limitação importante é que arrays dependem de sondas definidas — ou seja, têm menos sensibilidade para detectar mutações inéditas ou rearranjos complexos em regiões não contempladas pelas sondas; para isso, o sequenciamento de nova geração seria mais abrangente. No entanto, comparando com as outras técnicas clássicas listadas na questão, microarray é a ferramenta que permite avaliar simultaneamente dezenas de milhares de alvos, o que a torna a escolha prática para o estudo familiar descrito.

Alternativa A: INCORRETA. A reação em cadeia da polimerase (PCR) é a ferramenta básica para amplificar sequências específicas de DNA — é excelente quando se quer investigar um ou poucos genes ou amplicons conhecidos. Existem variantes em multiplex que amplificam alguns alvos ao mesmo tempo, mas não chegam nem perto da escala de dezenas de milhares de genes. Além disso, a PCR isolada não oferece um panorama genômico global e exigiria um número impraticável de reações para cobrir 30 mil genes.

Alternativa B: INCORRETA. Hibridização in situ (FISH, por exemplo) é ótima para localizar sequências específicas dentro de células ou núcleos e identificar translocações, deleções ou amplificações em regiões alvo — é uma técnica citogenética de resolução pontual. No entanto, é laboriosa, feita amostra a amostra e para um pequeno número de alvos por ensaio; não é adequada para triagem simultânea de dezenas de milhares de genes em múltiplos indivíduos.

Alternativa C: CORRETA. Microarray é a técnica projetada para análise em larga escala: permite a avaliação simultânea de milhares a milhões de sequências/sondas em um único experimento. Para o objetivo de estudar perfil genético de 30 mil genes e comparar frequências de mutações entre membros de uma família, arrays de SNP ou de expressão são opções práticas e econômicas. Lembre-se que o microarray detecta bem variantes conhecidas e padrões de expressão/CNVs, mas tem limitação para descobrir mutações totalmente novas em regiões não representadas pelas sondas — mesmo assim, para a proposta da questão, é claramente a melhor escolha entre as opções apresentadas.

Alternativa D: INCORRETA. Western blot é um método proteico usado para detectar e quantificar proteínas específicas em amostras, baseado em separação por eletroforese e detecção por anticorpos. Não fornece informação direta sobre variações genéticas em larga escala nem permite triagem de milhares de genes; portanto, é inadequado para o propósito descrito.

Resposta: Alternativa C