Dica do autor: As pontes dissulfeto são ligações covalentes formadas entre os grupos tiol (–SH) de dois resíduos de cisteína, estabilizando a estrutura terciária ou quaternária de proteínas. Essas ligações são fundamentais para manter o enovelamento correto, especialmente em proteínas secretadas ou estruturais. Em experimentos de desnaturação controlada, o objetivo pode ser romper essas pontes sem danificar a cadeia polipeptídica, permitindo o estudo de como a proteína se dobra ou se associa. Para isso, utiliza-se um agente redutor, como o ditiotreitol (DTT) ou o β-mercaptoetanol, que atua quimicamente sobre as ligações dissulfeto, convertendo-as em dois grupos tióis livres (–SH). Esse processo é altamente seletivo, não afeta outras ligações covalentes da cadeia principal e é amplamente utilizado em protocolos laboratoriais de SDS-PAGE, purificação e renaturação proteica.

Alternativa A: INCORRETA. A digestão com proteases específicas rompe ligações peptídicas, o que fragmenta a cadeia principal da proteína, sendo o oposto do desejado no contexto de manter a sequência primária intacta.

Alternativa B: CORRETA. Agentes redutores tiolativos, como ditiotreitol (DTT) ou β-mercaptoetanol, são os mais eficazes para romper pontes dissulfeto sem degradar a cadeia polipeptídica. Essa redução gera tióis livres (–SH), permitindo estudos estruturais subsequentes ou renaturação controlada.

Alternativa C: INCORRETA. pH ácido extremo pode desnaturar globalmente a proteína por protonação dos grupos carregados, mas não rompe seletivamente as pontes dissulfeto. Além disso, pode levar à hidrólise parcial de certas ligações peptídicas com tempo prolongado.

Alternativa D: INCORRETA. O SDS desnatura proteínas interferindo em interações não covalentes, mas não rompe pontes dissulfeto. Por isso, em SDS-PAGE, é necessário usar um agente redutor como o DTT além do SDS, quando se deseja romper essas ligações.

Alternativa E: INCORRETA. Íons divalentes como o cálcio modulam interações eletrostáticas e podem estabilizar ou desestabilizar proteínas, mas não afetam diretamente ligações covalentes como as dissulfeto.

Resposta correta: Alternativa B

Referências:

• Nelson, D. L., & Cox, M. M. (2017). Lehninger: Princípios de Bioquímica. 7ª edição. Artmed.
• Voet, D., Voet, J. G. (2011). Bioquímica. 4ª edição. Artmed.
• Scopes, R. K. (1994). Protein Purification: Principles and Practice. Springer.