Dica do autor: A técnica de mini-extração plasmideal por lise alcalina é amplamente utilizada em biologia molecular para isolar plasmídeos de células bacterianas. O processo se baseia em diferenças estruturais e de comportamento entre o DNA plasmideal (circular e superenovelado) e o DNA cromossômico (linear e de alto peso molecular). A adição de SDS e hidróxido de sódio (NaOH) rompe a membrana celular, desnatura proteínas e separa as fitas de DNA — tanto plasmideal quanto genômico. Em seguida, a adição de uma solução salina ácida (geralmente acetato de potássio) neutraliza o pH, promovendo a renaturação do DNA plasmideal, que é mais eficiente devido ao seu tamanho reduzido e estrutura circular superespiralada, enquanto o DNA cromossômico, mais longo e linear, precipita de forma irreversível junto com proteínas e detritos celulares. Essa propriedade permite a separação seletiva do DNA plasmideal em solução.

Alternativa A: INCORRETA. Embora existam proteínas que interagem com o DNA plasmidal no interior da célula, durante a mini-extração elas são desnaturadas pelo SDS e pelo NaOH. Não há proteção específica por proteínas que garanta sua renaturação.

Alternativa B: INCORRETA. O DNA plasmidal tem menor massa molecular do que o DNA genômico, e sua estabilidade térmica não é o fator determinante para a renaturação seletiva após neutralização do pH.

Alternativa C: INCORRETA. Pontes dissulfeto são formadas entre resíduos de cisteína em proteínas, não em moléculas de DNA. Essa opção apresenta erro conceitual ao associar o DNA a estruturas proteicas da parede celular por esse tipo de ligação.

Alternativa D: INCORRETA. A eletroforese é uma técnica posterior utilizada para analisar ou purificar o DNA, mas não ocorre durante a etapa de neutralização da mini-extração. A separação ocorre por precipitação diferencial, e não por eletroforese.

Alternativa E: CORRETA. O DNA plasmidal é circular e pequeno, características que favorecem sua renaturação eficiente após a neutralização com solução salina ácida. Já o DNA genômico, por ser linear e muito maior, não renatura corretamente e precipita com os detritos celulares. Essa diferença é a base para a separação seletiva do plasmídeo em solução.

Resposta correta: Alternativa E

Referências:

• NELSON, D. L.; COX, M. M. Lehninger: princípios de bioquímica. 8. ed. Porto Alegre: Artmed, 2021.
• RODWELL, V. W. Bioquímica ilustrada de Harper. 31. ed. Porto Alegre: AMGH, 2021.
• DEVLIN, T. M. Bioquímica: manual do estudante. 8. ed. Porto Alegre: Artmed, 2022.