Dica do autor: A etapa que estamos focando é a de impedir que o plasmídeo se feche novamente sem incorporar o gene de interesse. Alternativa A: INCORRETA. DNA Polimerase é usada principalmente na replicação de DNA e não tem nenhum papel em impedir a recircularização do plasmídeo. Alternativa B: INCORRETA. RNA Polimerase é usada na transcrição do DNA em RNA e não tem nenhum papel em impedir a recircularização do plasmídeo. Alternativa C: INCORRETA. DNA Ligase é usada para unir fragmentos de DNA, mas não tem o papel de impedir a recircularização do plasmídeo. Alternativa D:INCORRETA. Transcriptase Reversa é usada para converter RNA em DNA, geralmente em retrovírus, e não tem nenhum papel em impedir a recircularização do plasmídeo. Alternativa E: CORRETA. Fosfatase Alcalina pode remover grupos fosfato das extremidades do plasmídeo. Sem os grupos fosfato, a DNA ligase não pode religar o plasmídeo, impedindo sua recircularização sem a inserção do gene de interesse. Resposta correta: Alternativa E.