Dica do autor: A técnica de PCR (reação em cadeia da polimerase) apresenta diversas variações que expandem sua aplicação clínica, sendo adaptadas conforme o tipo de material genético e o objetivo diagnóstico. Três variações se destacam: a PCR convencional, a qPCR (quantitativa em tempo real) e a RT-qPCR (PCR com transcrição reversa acoplada à detecção quantitativa).

A PCR convencional é utilizada principalmente para identificação qualitativa de DNA, como em casos de bactérias ou protozoários, sendo o produto da amplificação analisado ao final do processo por eletroforese em gel.

A qPCR, por sua vez, permite a quantificação do DNA amplificado em tempo real, utilizando sondas fluorescentes ou corantes intercalantes como o SYBR Green. Já a RT-qPCR inclui uma etapa de transcrição reversa, convertendo RNA em DNA complementar (cDNA) antes da amplificação.

Essa variação é indispensável para detectar vírus de RNA, como o SARS-CoV-2, HIV, hepatite C, entre outros. É por isso que, durante a pandemia de COVID-19, o RT-qPCR se tornou o padrão-ouro para o diagnóstico laboratorial da infecção.

Alternativa A: INCORRETA. A qPCR é usada tanto para DNA quanto para RNA (com RT), e permite sim quantificação em tempo real. Ela não é exclusiva para vírus de DNA, nem desprovida da capacidade quantitativa — pelo contrário, essa é sua principal característica.

Alternativa B: INCORRETA. A PCR convencional não detecta proteínas bacterianas, mas sim material genético (DNA). A expressão gênica não é analisada por eletroforese, e sim por técnicas como northern blot, RT-qPCR (quando se avalia mRNA) ou proteômica. Para infecções por Salmonella, a PCR visa detectar genes específicos, não proteínas.

Alternativa C: INCORRETA. O RT-qPCR não é utilizado para detecção de DNA de bactérias anaeróbias, e tampouco detecta fluorescência de proteínas extracelulares. Ele é indicado para microrganismos com RNA como material genético, sendo a fluorescência derivada da amplificação de ácido nucleico, não de proteínas.

Alternativa E: INCORRETA. A PCR comum não permite quantificação em tempo real. Para esse fim, utiliza-se a qPCR ou a RT-qPCR, conforme o tipo de ácido nucleico do patógeno (DNA ou RNA). Assim, cargas virais de HIV e hepatite C são mensuradas por RT-qPCR, não pela PCR convencional.

Resposta correta: Alternativa D.

Referências:

1. Tortora GJ, Funke BR, Case CL. Microbiologia. 11ª ed. Porto Alegre: Artmed; 2017.
2. Murray PR, Rosenthal KS, Pfaller MA. Microbiologia Médica. 9ª ed. Rio de Janeiro: Elsevier; 2021.
3. Koneman EW, Allen SD, Janda WM, Schreckenberger PC, Winn WC. Diagnóstico Microbiológico: Texto e Atlas Colorido. 7ª ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan; 2018.
4. Mackay IM, Arden KE, Nitsche A. Real-time PCR in virology. Nucleic Acids Res. 2002;30(6):1292–1305.