Dica do autor: O cultivo in vitro de protozoários intracelulares, como os tripanossomatídeos, exige atenção rigorosa à composição do meio de cultura, bem como à temperatura, pH e suplementação nutricional. Muitos desses parasitas, como o Trypanosoma cruzi e as espécies de Leishmania, possuem estágios extracelulares adaptáveis ao cultivo, como as formas epimastigotas e promastigotas, respectivamente, que permitem estudos laboratoriais sem necessidade de células hospedeiras. Para isso, são utilizados meios como o NNN (Novy-MacNeal-Nicolle) e o meio de Schneider, ambos frequentemente suplementados com soro fetal bovino, que fornece fatores de crescimento e estabiliza o pH. A temperatura ideal gira em torno de 25–26 °C, reproduzindo o ambiente do vetor hematófago. O pH precisa ser mantido próximo à neutralidade (7,0–7,2), e a fase logarítmica de crescimento é aquela com maior atividade metabólica, sendo crucial para experimentos de replicação, estudos de sensibilidade a fármacos e ensaios imunológicos. Esses meios favorecem a manutenção e multiplicação das formas extracelulares cultiváveis, viabilizando experimentos com parasitas que, na natureza, apresentam obrigatoriedade intracelular em alguns estágios do ciclo. 

Alternativa A: INCORRETA. Meios bifásicos à base de sangue animal e ágar, cultivados a 26–28 °C, são sim úteis para tripanossomatídeos, mas não se aplicam a helmintos, que não se replicam in vitro em meios de cultura, sendo organismos multicelulares com exigências completamente diferentes. 

Alternativa B: INCORRETA. A incubação a 37 °C sob anaerobiose é utilizada para cultivo de protozoários intestinais anaeróbios, como Entamoeba histolytica, mas não é adequada para tripanossomatídeos, que requerem oxigenação moderada e não se replicam sob anaerobiose. 

Alternativa C: INCORRETA. Meios com nutrientes básicos e sem suplementação proteica não sustentam crescimento de protozoários com metabolismo exigente, como os tripanossomatídeos. A ausência de soro inviabiliza o cultivo de formas extracelulares ativas. 

Alternativa D: CORRETA. O meio NNN (bifásico, com base sólida de sangue coágulo e fase líquida) e o meio de Schneider (líquido, formulado inicialmente para cultivo de células de inseto) são amplamente utilizados para tripanossomatídeos, especialmente as formas promastigotas e epimastigotas. A suplementação com soro fetal bovino e o controle de temperatura (25–26 °C) criam as condições ideais para crescimento in vitro.

Alternativa E: INCORRETA. Meios sólidos seletivos com inibidores bacterianos são usados para isolamento microbiológico, especialmente de fungos e bactérias, mas não são apropriados para cultivo contínuo de protozoários como Leishmania ou Trypanosoma, que demandam meios líquidos ou bifásicos com suplementação. 

Resposta Correta: Alternativa D 

Referências:

Neves DP. Parasitologia Humana, 13ª ed. São Paulo: Atheneu, 2016.

Barrett MP, Croft SL. Management of trypanosomiasis and leishmaniasis. British Medical Bulletin, 2002.

Ministério da Saúde. Manual de diagnóstico laboratorial das leishmanioses, 2020.