Dica do autor: Quando lidamos com isoformas proteicas — variantes da mesma proteína que diferem levemente em sua composição, como no número de resíduos carregados — é fundamental escolher uma técnica de purificação que explore propriedades físico-químicas sensíveis, mesmo que a massa e a estrutura terciária sejam semelhantes. Em pH fisiológico (~7,4), aminoácidos como ácido aspártico e glutâmico encontram-se desprotonados, conferindo carga negativa à proteína. Portanto, isoformas que diferem na quantidade desses resíduos terão cargas líquidas diferentes, ainda que suas massas sejam praticamente idênticas. Para separar moléculas com base na carga elétrica, a melhor estratégia é a cromatografia de troca iônica. Especificamente, para separar proteínas com maior número de cargas negativas, utiliza-se uma coluna de troca aniônica, com resina carregada positivamente (ex: DEAE – dietilaminoetil). Proteínas mais carregadas negativamente interagem com mais força com a matriz, sendo eluídas mais tardiamente. Essa abordagem é extremamente sensível às variações de carga e ideal para isoformas.

Alternativa A: CORRETA. A cromatografia de troca aniônica, com resina carregada positivamente, separa proteínas com base em suas cargas negativas. Isoformas com mais resíduos ácidos terão maior afinidade com a matriz, permitindo sua discriminação eficaz. É a técnica mais apropriada nesse contexto.

Alternativa B: INCORRETA. A cromatografia de afinidade explora interações específicas com ligantes (como substratos, cofatores ou anticorpos) e não é sensível à carga elétrica. Isoformas com estrutura terciária preservada provavelmente se ligariam igualmente ao substrato, falhando em diferenciá-las.

Alternativa C: INCORRETA. A cromatografia por interação hidrofóbica separa proteínas com base na exposição de regiões apolares, o que não é o fator diferencial entre as isoformas aqui descritas, que têm estrutura e hidrofobicidade similares.

Alternativa D: INCORRETA. A eletroforese em gel desnaturante (ex: SDS-PAGE) separa proteínas por massa aparente, ignorando diferenças de carga natural, uma vez que o SDS impõe carga negativa uniforme às proteínas. Não é útil para separar isoformas com massas semelhantes.

Alternativa E: INCORRETA. A centrifugação em gradiente de sacarose discrimina moléculas com base em densidade e forma molecular, sendo usada para organelas ou grandes complexos. Não é suficientemente sensível para separar isoformas proteicas semelhantes.

Resposta correta: Alternativa A

Referências:

• Nelson, D. L., & Cox, M. M. (2017). Lehninger: Princípios de Bioquímica. 7ª edição. Artmed.
• Scopes, R. K. (1994). Protein Purification: Principles and Practice. 3ª edição. Springer.
• Voet, D., Voet, J. G. (2011). Bioquímica. 4ª edição. Artmed.