Dica do autor: A hibridização in situ fluorescente (FISH) é uma ferramenta essencial na citogenética molecular e no diagnóstico oncológico e genético moderno. Essa técnica baseia-se no princípio fundamental da complementaridade das bases nitrogenadas, um dos pilares da estrutura do DNA.
O método utiliza sondas de DNA marcadas com fluorocromos (moléculas fluorescentes) que são complementares a regiões específicas do genoma. Quando aplicadas a cromossomos, essas sondas hibridizam às sequências correspondentes. Após a lavagem para remover o excesso, a lâmina é observada sob um microscópio de fluorescência, revelando a localização e integridade das sequências alvo.

A FISH é amplamente utilizada em:

• Diagnóstico de neoplasias hematológicas, como a leucemia mieloide crônica (LMC), onde detecta o cromossomo Filadélfia (t(9;22)(q34;q11)) e o gene híbrido BCR-ABL;
  
  

• Análises de aneuploidias, como trissomias (síndrome de Down, Edwards e Patau);
  
  

• Diagnóstico pré-natal e infertilidade, detectando deleções ou duplicações cromossômicas;
  
  

• Confirmação de resultados obtidos por microarranjos ou PCR.
  
  

O grande diferencial da FISH é combinar precisão molecular com visualização citogenética direta, permitindo a análise de localização física de genes, translocações e alterações estruturais de cromossomos em células metafásicas ou interfásicas.
Na LMC, a detecção do gene BCR-ABL é essencial, pois sua presença orienta o tratamento com inibidores de tirosina quinase (como o imatinibe), demonstrando como a biologia molecular se traduz em decisões terapêuticas personalizadas.

Alternativa A: INCORRETA. O Southern blot detecta DNA em membranas, mas não permite visualização cromossômica direta.

Alternativa B: INCORRETA. Microarranjos avaliam expressão gênica em larga escala, mas não identificam translocações cromossômicas.

Alternativa C: INCORRETA. A qPCR pode detectar transcritos de fusão (como BCR-ABL), mas não revela a localização física dos genes.

Alternativa D: CORRETA. A hibridização in situ fluorescente (FISH) usa sondas marcadas com fluorocromos para identificar e visualizar regiões específicas do DNA, sendo a técnica padrão para detectar translocações como o cromossomo Filadélfia.

Alternativa E: INCORRETA. O sequenciamento Sanger identifica mutações pontuais, mas não é adequado para observar grandes rearranjos cromossômicos.

Resposta correta: Alternativa D.

Referências bibliográficas:

• LEHNINGER, A. L. Princípios de Bioquímica. 8ª ed. Artmed, 2022.
  
  

• WATSON, J. D. et al. Molecular Biology of the Gene. 8th ed. Pearson, 2023.
  
  

• VOET, D.; VOET, J. G. Biochemistry. 5th ed. Wiley, 2021.
  
  

• HARPER, D. Harper’s Illustrated Biochemistry. 32nd ed. McGraw-Hill, 2023.
  
  

• ROWLEY, J. D. Nature, 1973;243(5405):290–293 — “A new consistent chromosomal abnormality in chronic myelogenous leukemia identified by quinacrine fluorescence and Giemsa staining.”