Dica do autor: No processo de obtenção de DNA recombinante, uma das primeiras e mais importantes etapas é a clivagem do DNA por enzimas de restrição. Essas enzimas, também chamadas de endonucleases de restrição, reconhecem sequências palindrômicas específicas no DNA — ou seja, sequências que têm a mesma leitura nas direções 5’ → 3’ e 3’ → 5’. A clivagem pode gerar dois tipos principais de extremidades:

• Extremidades coesivas (ou “sticky ends”), com nucleotídeos desemparelhados que se ligam por complementaridade;
• Extremidades cegas (ou “blunt ends”), quando os cortes são retos e simétricos.

Essa etapa é essencial para permitir a união precisa entre diferentes fragmentos de DNA, como um gene de interesse e um vetor plasmidial. Após essa clivagem, os fragmentos podem ser unidos por DNA ligase, formando a molécula recombinante.

Alternativa A: INCORRETA. Hibridização molecular refere-se ao pareamento de sequências complementares de ácidos nucleicos, geralmente em técnicas de diagnóstico ou análise, e não ao corte do DNA.

Alternativa B: INCORRETA. A transformação bacteriana é o processo em que o DNA recombinante é inserido em células bacterianas, mas essa etapa ocorre após a clivagem e a montagem do DNA.

Alternativa C: CORRETA. A clivagem por enzimas de restrição é a etapa responsável por reconhecer sequências palindrômicas específicas e gerar as extremidades necessárias para a montagem do DNA recombinante.

Alternativa D: INCORRETA. A PCR (reação em cadeia da polimerase) é utilizada para amplificar segmentos de DNA, não para cortá-los. Essa técnica não depende de enzimas de restrição.

Alternativa E: INCORRETA. A DNA polimerase é responsável por sintetizar novas fitas de DNA, geralmente durante a replicação ou PCR. Ela não atua na clivagem nem na ligação de fragmentos no processo de obtenção de DNA recombinante.

Resposta correta: Alternativa C

Referências:

• NELSON, D. L.; COX, M. M. Lehninger: princípios de bioquímica. 8. ed. Porto Alegre: Artmed, 2021.
• RODWELL, V. W. Bioquímica ilustrada de Harper. 31. ed. Porto Alegre: AMGH, 2021.
• DEVLIN, T. M. Bioquímica: manual do estudante. 8. ed. Porto Alegre: Artmed, 2022.