Dica do autor: A união de fragmentos de DNA de origens diferentes, após a clivagem com enzimas de restrição, é um passo fundamental na tecnologia do DNA recombinante. As enzimas de restrição reconhecem sequências específicas e cortam o DNA, gerando extremidades coesivas ou “pontas pegajosas” que podem se parear por complementariedade. No entanto, para que essas junções sejam estáveis e funcionalmente integradas, é necessária uma enzima que forme as ligações fosfodiésteras entre os nucleotídeos adjacentes — essa função é desempenhada pela DNA ligase. Essa enzima sela as “quebras” na cadeia de DNA, consolidando a molécula recombinante. Sem a ação da DNA ligase, o DNA inserido não se estabiliza no vetor, inviabilizando sua replicação ou expressão.

Alternativa A: CORRETA. A DNA ligase é a enzima responsável por unir os fragmentos de DNA após a ação das enzimas de restrição. Ela catalisa a formação da ligação fosfodiéster entre o grupo fosfato de um nucleotídeo e a hidroxila de outro, garantindo a integridade da dupla-hélice recombinada.

Alternativa B: INCORRETA. A RNA polimerase é responsável por sintetizar RNA a partir de um molde de DNA durante a transcrição. Ela não atua na ligação entre fragmentos de DNA.

Alternativa C: INCORRETA. A helicase separa as fitas da dupla-hélice de DNA durante a replicação ou transcrição, rompendo as pontes de hidrogênio. Não tem função de ligação entre fragmentos.

Alternativa D: INCORRETA. As endonucleases, como as enzimas de restrição, realizam o corte do DNA em pontos específicos. Elas são fundamentais para gerar os fragmentos, mas não para uni-los.

Alternativa E: INCORRETA. A transcriptase reversa é uma enzima viral que converte RNA em DNA complementar (cDNA). Seu uso é típico em estudos com retrovírus e em clonagem de genes expressos, mas não une fragmentos de DNA.

Resposta correta: Alternativa A

Referências:

• NELSON, D. L.; COX, M. M. Lehninger: princípios de bioquímica. 8. ed. Porto Alegre: Artmed, 2021.
• RODWELL, V. W. Bioquímica ilustrada de Harper. 31. ed. Porto Alegre: AMGH, 2021.
• DEVLIN, T. M. Bioquímica: manual do estudante. 8. ed. Porto Alegre: Artmed, 2022.