No dia 15 de agosto de 2020, a Food and Drug Administration (FDA) dos EUA, emitiu uma autorização para a Escola de Saúde Pública de Yale permitindo a utilização de seu teste diagnóstico denominado de Saliva Direct, para uso emergencial como diagnóstico do vírus Sars-Cov. Esse teste utiliza a amostra de saliva do indivíduo a ser testado como um novo método para o diagnóstico do Covid-19 e proporciona a detecção e isolamento rápido dos casos ativos de contágio pelo vírus. Com isso, o uso da saliva se mostra uma alternativa promissora na triagem epidemiológica além de ser de fácil coleta e não invasiva.
O Saliva Direct:
O teste por saliva para diagnóstico do novo Coronavírus está entre os cinco testes que utilizam a coleta de saliva aprovados pela FDA. É um teste eficaz e simples que não necessita de nenhum tipo especial de cotonete (swab) ou dispositivo de coleta, a amostra de saliva pode ser coletada em qualquer recipiente desde que estéril.
Além disso, é considerado único por não exigir a extração de ácido nucleico (RNA) em uma etapa separada, o que é bastante significativo, visto que os efeitos de kits de extração que são necessários nessa etapa, em outros testes estavam sujeitos a escassez.
A metodologia SalivaDirect foi validada e licenciada para uso com diferentes combinações de reagentes e instrumentos comumente usados, o que significa que o teste pode ser usado extensivamente na maioria dos laboratórios de alta complexidade autorizados.
Fonte: https://sergiofranco.com.br/saude/rt-pcr-salivar
A metodologia do teste:
O teste diagnóstico para Covid-19 por saliva é um protocolo e não um kit, portanto, não existem produtos para distribuir. Em vez disso, para laboratórios designados, é fornecido um protocolo para fazer testes RT-qPCR baratos baseados na saliva.
Assim requer um laboratório certificado CLIA de alta complexidade e apesar de ter sido removida a difícil etapa de extração de RNA, o teste ainda é considerado complexo, pois requer PCR.
Fonte: https://publichealth.yale.edu/salivadirect/
PCR quantitativa em tempo real (qPCR):
A reação em cadeia da polimerase (PCR) revolucionou a análise quantitativa de DNA e RNA. A técnica evoluiu rapidamente nos últimos anos e o crescente interesse em aplicações da PCR favoreceu o desenvolvimento da PCR quantitativa em tempo real, também conhecida como qPCR. Essa técnica é atualmente o padrão ouro para o diagnóstico da COVID-19 de acordo com a Organização Mundial da Saúde (OMS).
Tem como principais características a detecção e quantificação de fluorescência emitida durante cada ciclo de uma reação de PCR e a sensibilidade de detectar poucas cópias de DNA presentes em uma dada amostra. Se uma pessoa estiver trabalhando com amostra de RNA, inicialmente é necessário realizar a sua conversão para DNA complementar (cDNA) antes com reagentes específicos, etapa conhecida como transcrição reversa (RT). Portanto, a PCR que utiliza o RNA como molde é conhecida como RT-qPCR. Por exemplo, como o Sars-CoV2 é um vírus de RNA, para avaliar seu material genético em uma amostra biológica é necessário fazer essa etapa de transcrição reversa no laboratório.
No teste de diagnóstico de Covid-19, através da saliva, é removida a etapa de extração do RNA viral, facilitando o processo do exame e utilizando menos tempo e materiais. Entretanto é um teste que ainda exige o método PCR.
Fonte: https://www.igenomix.com.br/blog/o-que-e-a-tecnica-de-rt-qpcr-para-deteccao-dos-casos-de-covid-19/
Para quem o RT-PCR salivar é indicado:
O RT-PCR é um teste para diagnóstico atual da doença COVID-19 (avaliação da presença do vírus).
Sintomáticos: preferencialmente nos 7 dias iniciais da doença, em especial nas seguintes condições:
- Pacientes que não toleram a coleta por swab de nasofaringe ou que apresentam restrições para este tipo de coleta;
- Crianças e idosos por ter a coleta facilitada.
Assintomáticos:
- Avaliação de contactantes de caso confirmado de COVID-19;
- Rastreio epidemiológico (em massa), quando realizado de maneira recorrente (a cada 72h), permitindo decisão rápida de isolamento e controle de surto.
Fonte: http://www.rbac.org.br/artigos/diagnostico-laboratorial-do-sars-cov-2-por-transcricao-reversa-seguida-de-reacao-em-cadeia-da-polimerase-em-tempo-real-rt-pcr/
Orientações importantes para o exame por saliva:
- Não tomar água 10 minutos antes da coleta;
- Evitar comida, bebida e spray nasal 30 minutos antes da coleta;
- Em situações de menor quantidade do vírus nas secreções respiratórias, como infecções assintomáticas, o desempenho do teste RT-PCR salivar é ligeiramente inferior ao RT-PCR em swab de naso/orofaringe, por isso, o resultado “Não-Detectado” não descarta a presença do vírus em concentração inferior ao limite de detecção do teste, o que pode ocorrer nos dias iniciais ou finais da infecção e em portadores assintomáticos;
- É importante sempre correlacionar o resultado desse exame com o quadro clínico e outros achados laboratoriais do paciente;
- Consulte a disponibilidade do exame com o nosso time de atendimento;
- Exame incluso no rol ANS e cobertura do exame em planos e seguros saúde conforme Diretriz de Utilização.
Resultado do teste por saliva:
O prazo para o resultado é de, em média, até 72h da realização do teste.
Existem dois resultados possíveis para o exame de RT-PCR pela saliva: “detectado” (indicativo de infecção atual) e “não detectado” (indicativo de ausência de infecção atual).
Benefícios do uso do teste salivar como diagnóstico para Covid-19:
A coleta de amostras de saliva tem algumas vantagens, como eliminar a necessidade de interação direta entre profissionais de saúde e pacientes, além de aliviar a demanda por suprimentos de cotonetes e equipamentos de proteção individual. Além disso, outro ponto a ser considerado é que o procedimento da coleta é muito simples e nada doloroso.
Porém, o RT-PCR (swab nasal) continua sendo considerado padrão-ouro para detecção da contaminação pelo Covid-19, apesar de ser mais caro (470 reais), invasivo e doloroso.
Estudo de Comparação entre RT-PCR swab nasal e RT-PCR salivar para diagnóstico de Covid-19:
O padrão ouro atual para detectar o RNA de SARS-CoV-2 é por reação em cadeia da polimerase em tempo real de transcrição reversa (RT-rtPCR) em swabs nasofaríngeos (NPS). Por esse motivo, a demanda pelos NPS aumentou e sua escassez se tornou uma realidade em muitos países. Com isso, o uso da saliva se mostra uma alternativa promissora na triagem epidemiológica além de ser de fácil coleta e não invasiva.
O New England Journal of Medicine publicou um artigo avaliando a sensibilidade das amostras de saliva durante o curso da infecção. Para esse estudo, foram observados um total de 70 pacientes internados com Covid-19. Após a confirmação de Covid-19 por esfregaço de nasofaringe, foram obtidas amostras de saliva coletadas pelos próprios pacientes em que foram obtidos os seguintes resultados:
- Foram detectadas mais cópias de RNA de SARS-CoV-2 nas amostras de saliva do que espécimes de esfregaço nasofaríngeo;
- Uma porcentagem maior de amostras de saliva em comparação com amostras de esfregaço nasofaríngeo foi positiva até 10 dias após o diagnóstico de Covid-19;
- Entre 1 a 5 dias após o diagnóstico, 81% das amostras de saliva foram positivas, em comparação com 71% das amostras de esfregaço nasofaríngeo, o que sugere sensibilidade semelhante entre as amostras;
- O nível de RNA de SARS-CoV-2 diminuiu após o início dos sintomas em ambas as amostras de saliva e espécimes de esfregaço nasofaríngeo. Em três casos, uma amostra negativa de esfregaço nasofaríngo foi seguida por um esfregaço positivo na próxima coleta de uma amostra. Este fenômeno ocorreu apenas uma vez com as amostras de saliva.
Conclusão sobre o teste salivar como diagnóstico para Covid-19:
Dada a crescente necessidade de testes, os resultados do estudo fornecem suporte para o potencial das amostras de saliva no diagnóstico da infecção por SARS-CoV-2.
Além disso, a possibilidade de detectar e isolar rapidamente os casos ativos (pessoas que podem transmitir o vírus), sejam sintomáticos ou assintomáticos, torna-se a pedra angular para limitar a propagação da doença, além de proporcionar dados precisos sobre o número de casos ativos que são necessários para informar aos formuladores de políticas (em níveis local, estadual e federal), bem como aos indivíduos, qual é o risco de disseminação de curto prazo e quão seguro é fazer coisas como devolver para locais de trabalho, frequentar a escola e ver amigos e familiares.
Portanto, o teste salivar para diagnóstico de Covid-19, torna-se um método diagnóstico para casos ativos promissores, mais simples, menos caro e invasivo que o swab nasofaríngeo.
Autora: Júlia Cantu
Instagram: @jucantu_
O texto é de total responsabilidade do autor e não representa a visão da sanar sobre o assunto.
Observação: material produzido durante vigência do Programa de colunistas Sanar junto com estudantes de medicina e ligas acadêmicas de todo Brasil. A iniciativa foi descontinuada em junho de 2022, mas a Sanar decidiu preservar todo o histórico e trabalho realizado por reconhecer o esforço empenhado pelos participantes e o valor do conteúdo produzido. Eventualmente, esses materiais podem passar por atualização.
Novidade: temos colunas sendo produzidas por Experts da Sanar, médicos conceituados em suas áreas de atuação e coordenadores da Sanar Pós.
Referências:
Atualização do Coronavirus (COVID-19): FDA emite autorização de uso de emergência para a Yale School of Public Health para SalivaDirect, usando novo método para processar amostras de saliva em: https://www.fda.gov/news-events/press-announcements/actualizacion-sobre-el-coronavirus-covid-19-la-fda-emite-una-autorizacion-de-uso-de-emergencia-la
Saliva or Nasopharyngeal Swab Specimens for Detection of SARS-CoV2 em:https://www.nejm.org/doi/full/10.1056/NEJMc2016359
ACCELERATED EMERGENCY USE AUTHORIZATION (EUA) SUMMARY SARS-CoV-2 RT-PCR Assay em:https://publichealth.yale.edu/salivadirect/4-EUA202097%20S007%20EUA%20summary%2003122021_397684_5_v4.pdf
Novo teste para Covid-19 através da saliva em: https://pebmed.com.br/novo-teste-para-covid-19-atraves-da-saliva/
Novo teste rápido de Covid-19 em saliva é lançado no Brasil em: https://pebmed.com.br/novo-teste-rapido-de-covid-19-em-saliva-e-lancado-no-brasil/
RT-PCR PELA SALIVA: CONHEÇA O TESTE PARA COVID-19 SIMPLES E INDOLOR em: https://altadiagnosticos.com.br/saude/rt-pcr-salivar
